约2 h。对照组直接灌流处死。假手术组仅行颅骨钻
孔，术后24h灌流处死。矢状位取材，固定。
三、常规he和免疫组织化学染色法
把固定好的标本梯度脱水后，制作10 i．zm冰冻
切片，行he和免疫组织化学染色法。操作步骤参照
试剂盒说明书进行，一抗稀释度为1：100，用pbs取
代一抗作阴性对照，以细胞核或胞浆出现棕黄4534535aaa色产
物为阳性结果。兔hif—lcdgg多克隆抗体购自武汉
博士德公司，sabc免疫组化试剂盒、dab显色试剂
盒购自北京莱博公司：其他试剂均为国产分析纯。
四、图像分析及统计学处理
各组切片运用bi一2000图像分析系统，在脑挫
伤区周围随机选取5个高倍视野(×200)，进行
· 。77 ·
hif一1仅免疫组化染色阳性细胞记数。实验数据采用
spss l1．5统计软件进行方差分析和q检验，数据以
均数±标准差(x+s)表示。
结 果
一
、he染色结果
对照组神经元细胞形态、结构正常，核染色较
淡、圆形，核仁明显；损伤组可见脑组织出血、挫碎，
蛛网膜下腔、侧脑室出血。所选切面各部位均可见程
度不一的神经元皱缩，染色较深，核深染，核仁消失，
突触减少，神经元细胞周围出现空隙，逐渐发展为神
经元坏死、胞核溶解。胶质细胞肿胀，细胞周围间质
水肿。
二、hif一1 oc蛋白免疫组织化学染色
对照组神经细胞偶见hif一1仪表达。伤后2 h组
即可观察到阳性反应细胞，呈散在少量分布，阳性产
物呈棕黄4534535aaa色，主要位于神经细胞胞核及胞浆内(照片
1)。伤后6 h可见表达hif—la的神经细胞数增多，
表达强度增强，差异有显著性(照片2)；24 h后达高
峰(照片3)。随后阳性反应细胞逐渐减少，7d后仍见
少量表达(照片4)；14d后恢复。表达呈弥漫性，以
大脑皮层、脑干、海马最为明显，不同部位的变化趋
势一致．阳性反应细胞包括神经元及各类胶质细胞。
hif一1仅蛋白表达的阳性细胞数，见表2。
表2 脑挫伤后ltif-lot阳性细胞计数
table 2 hⅱ’一1d positive cells count after cerebral contusion
注：★表示与对照组比较p<o．05：#表示与对照组比较／3>0．05o
讨 论
hif一1是在研究缺氧诱导促红细胞生成素
(erythropoietin，epo)基因表达时发现的，是一类由
两个亚单元hif一1仅、hif一113组成的异二聚体，其中
hif一1仅由826个氨基酸组成．分子量约120 kd，
含有两个转录激活区(transactivation domains，
tads)，一个称作n一末端激活区(n2terminal activa．
tion domain。nad)。另一个称作c一末端激活区(c—
terminal activation domain，cad)。另夕 ，hif一1仅还
含有一个独特的氧依赖降解区域(oxygen—dependent
degradation domain，odd)．在控制hif一1仅稳定方
面起关键作用lli21。hif一1仅在常氧状态下经泛素一蛋
白酶体途径被迅速降解，当机体处于低氧环境时，细
胞周围的氧分压降低，hif—la降解受阻，在胞浆中
累积．并核转位到细胞核中与hif一113结合形成有
活性的hif一1。hif—l仅与靶基因启动子或增强子缺
氧反应元件(hypoxia～response element，hre)上的5
一a／gcgtg一3 序列结合进而调节靶基因的表
·
78 · 法律与医学杂志20xx年第14卷(第1期)
照片l 伤后2h出现hif—l 阳性表达；照片2 伤后6h hif-la阳性表达明显增加；照片3伤后24h，阳性表达达高峰；照片4伤后7d少
量阳性细胞表达。ph0t0 1．the expre~ion of hif—la p~tein at 2h after cerebral contusion(sabc x200)；pho~ 2．hif—la po~tive-cells
and tbe inteilsity 0f stain increased remarkably in number at 6h after brain i ury(sabc x200)；pho~ 3．the inte璐ity and the area of
hw-la positive cells p~ked at 24h after uf (sabc x200)；photo 4．~tfle expression was found at 7d after i ury(sabcx200)
达。hif一1 o【作为低氧应答的全局性调控因子，能够
激活100多种低氧适应性基因的表达。hif—l 对基
因表达调节的广泛作用涉及血管发生、血管重塑、红
细胞生成、糖酵解等各个方面，因此是机体对氧浓度
改变的一系列自适应反应中最重要的调节因子。
脑挫伤后，脑组织缺血缺氧所致的氧化应激可
以诱导hif—l o【的表达升高，从而促使细胞凋亡，防
止细胞坏死甚至能够刺激细胞增殖。freret等[引在大
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