控制区碱基变异。实验观察组织问异质性的发生存在
与
卵细胞形成过程中类似的瓶颈，ciafaloni等发现同
一个体不同组织变异型与野生型mtdna出现率有差
异，证实了组织问存在异质性的分离。例如某妇女，经
过多次提取口腔拭子和血样，检测出异质性，同个体
头发材料，5根是16355t，3根是16355c，2根是两种
型的混合物。提示在细胞分化、发育过程中也可能存
在另一种瓶颈。
二、mtdna异质性的类型及好发位置
异质性按其存在形式分为点异质性和长度异质
性两类，它既可发生在代问也可发生于代内。正常人
mtdna异质性高发于控制区，而编码区几乎没有。[61
通常，异质性序列之间差异仅限于某一个碱基，称
为点异质性。同时出现两个位置碱基序列不同的概率
虽小，但仍有报道：而同时出现3个或者3个以上的
情况至今尚未见报道。mtdna序列变异主要是复制过
程中碱基错配，其中转换占90％以上。少数是颠换。点
异质性主要集中于hvi和hvii。hvi碱基转换类型
多发生在嘧啶之间，约为80％。hvii的转换碱基中，
嘧啶与嘌呤约各占一半。颠换多发生于c和a之间．
并几乎都集中在hvi。人群中点异质性的发生率因检
测方法的灵敏度不同而差异很大。hvi 16 189nt碱基
替换的发生率很高，其中t—c转换高达l5％。
长度异质性主要发生于hvi 16184 16193 nt
和hvii 303—315 nt的c—stretch区，表现为c数目
的差异。在序列测定时可观察到16 189 nt和310 nt
后多个信号峰交叠形成的模糊序列，即“手指样结
构”。[71根据anderson序列，c—stretch分别于16 189 nt
和310nt被t阻断，可能由于复制滑动引起的相同碱
基单调连续趋势，该区被认为是突变的热点 而这一
趋势产生了长度异质性。bendall等[8】也认为长度异质
性形成原因主要是dna 复制滑动。无关个体问
mtdna长度异质性差异较大，根据hvii 303 309
nt碱基c数目的多少，可分为单纯同质性(c7)、轻度
异质性(c8为主)、明显异质性(c8和c9为主)和t—c
转换后序列失控(c10一c14)4种。hvi 16 189nt约
l5％的t—c转换中又有66％形成长度异质性。[91与
hvi不同，hvii的t很少缺失。由此认为hvii的长度
异质性机制是c在303—309 nt区域内的插入和复制
滑动，形成3lont p c的转换。同一母系中，与16 189
· l4l ·
突变相关的长度异质性，分布和变化相对稳定，但无
关个体问差异很大。bini等[1ol研究发现异质性长度c
的个数与c—stretch上游的a碱基数目呈负相关，相
对于c数目的不稳定性，同一个体a数目恒定，这一
发现对家系分析和法医学领域中包括单根毛发在内
的组织比较有较大意义。一般而言，如果c—stetch区
的c多于8个，就会增加长度异质性的几率。⋯1
通常．骨骼肌和神经组织的异质性水平相似，毛
发中相对较高．外周血的异质性最低。[121
三、mtdna异质性检测方法
(一)测序
序列测定是检测mtdna多态性和异质性最常用
的方法。尽管一直以来测序被认为是检测突变的金标
准，但若异质性水平低于20％该方法即很难检出，这
也是先前普遍认为异质性发生率很低的原因。克隆后
测序又比pcr产物直接测序更可靠，因其可排除因
pcr过程中taq dna聚合酶滑脱造成的序列改变。
对hvii轻链测序发现，由于临近c—stretch区产生的
长度异质性使3lont的异质性比率达50％，这是一种
普通的人为假象，通过对重链的测序可消除该假象。[131
因此为避免可能存在的影响，mtdna高变区序列测定
要求对重链和轻链进行双向测序，并至少重复一次。
(二)序列特异性寡核苷酸(aso)探针杂交
pcr—aso分析技术先用pcr扩增得到靶dna
片段，再用aso探针与目的dna扩增片段杂交．阳性
结果说明靶dna含有与探针相应的等位基因。尽管
pcr—aso分析技术有操作简单、灵敏度高、特异性好
等优点，但目前所用特异性探针较少，系统的个人识
别能力有限是其局限性之一。多重pcr特异性寡核苷
酸片段用于检测突变链，可以发现小于l％的异质性，
然而等位特异性扩增很容易受pcr初始熔链温度的
影响，易发生错误的扩增，且无法估计异质性的数量。
(三)限制性片段长度多态性(restriction 哪ent
length polymorphism，rflp)分析
在mtdna高变区，大约有2／3的碱基变异涉及限
制酶识别位点，故可用rflp检测点异质性。与直接测
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