序相比，荧光rflp分析较低程度的异质性更灵敏一
些。但应注意避免因不完全消化而导致错误的结论。
(四)单链构象多态性(single strand conformation
polymorphism，sscp)分析
pcr—sscp技术可灵敏地检测到单一碱基的突
变，且具有操作简单、快速、成本低、灵敏度高、无假阳
性等特点，适用于大样本dna突变的筛查。但存在影
响因素较多、条件不易掌握及带型难以解释等问题。
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基于毛细管电泳技术发展起来的荧光sscp(f—sscp)
技术，其灵敏度非常高，特异性好，但技术要求及成本
均很高。
(五)变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel
electrophoresis，dgge)
dgge是基于待测dnxx片段双螺旋的解链温度
(tm)来进行突变检测的，它具有灵敏度高、分离片段
可回收测序、一次可检测大量样本等优势。1999年，
steighner等㈣在评估pcr—dgge技术检测mtdna
hv1序列多态性的可靠性时。所有设计的49对配对
序列(每对仅存在1bp差异)用该技术可全部有效加
以区分。pcr—dgge技术检测异质性的灵敏度高达
l％ ，远远高于序列测定。但该技术存在实验之初需进
行计算机分析或预试验以确定最佳的分离条件、需使
用带gc—clamp的引物增加了实验费用、gc含量较高
的片段不易分析、制备精确的梯度凝胶需要熟练的操
作技巧及复杂的仪器设备、仅能检测突变的存在不能
确定突变的类型等不足
(六)变性高效液相色谱(denaturing high—performance
liquid chromatography，dhplc)技术
dhplc是一种可自动检测单碱基替代及小片段
核苷酸插入或缺失的一种高性价比分离技术．具有自
动化、快速、经济、检出率高、检出dnxx片段大小范围
广、既可分析已知突变也能筛查未知变异等优点．成
为目前分析已知或未知基因突变及单核苷酸多态性
的最佳技术平台。目前只有f—sscp技术在敏感性和
特异性方面能与dhplc相媲美。其不足是不能检测
纯合突变(要检测纯合变异一定要预混等量的野生型
样品以产生异源杂合双链)，只能提示突变的存在．无
法确定具体的错配类型及位置，尚需测序进一步确
定；许多片段有多个主要解链温度．需要筛查的温度
点较多，增加了工作量。
dhplc可直接通过异源双链的形成来检测异质
性的存在。如有必要，还可根据保留时间的差异将不
同的片段各自收集后测序
(七)其他检测方法
融解曲线分析、基质辅助激光吸附电离飞行时间
质谱(matrix assisted laser desorption lonization time
of flight mass spectrometry，maldy—tof—ms)．dna
芯片(dna chip)等技术，都可以用于mtdna异质性
的检测
四、mtdna异质性的法医学应用及展望
mtdna因其母系遗传特征、进化速率快、拷贝数
多等特点，使其在法医学鉴定中，尤其是对毛干、指甲
法律与医学杂志20xx年第13卷(第2期)
等无核生物检材或核dna分型失败的样本具有特殊
的应用价值。一方面，由于mtdna异质性的存在，使
其在进行常规个体识别和亲子鉴定等应用时使鉴定
结果产生不确定性；另一方面，mtdna异质性又可作
为个体的特殊标记，增加个体的认定或排除的确定
性。
法医个体识别鉴定中第一次遇到异质性问题是
末代沙皇尼古拉二世的遗骸鉴定案。l15】此后，mtdna
异质性问题逐渐引起法医学界的重视。早期研究认
为．mtdna的异质性在正常人群中很少见，可能与当
时的检测技术缺乏敏感性有关。随着相关技术的发
展．越来越多的文献报道在非编码区检出异质性，并
且以一定的频率存在于正常人群中。2o0o年，tully等
用dgge技术对253个随机个体血样的mtdna
hv1进行了分析．发现35个个体(13．8％)存在异质
性．其中33个为单核苷酸异质．2个为二核苷酸异质，
这些异质性共涉及16个不同的核苷酸．进一步证实
了mtdna异质性存在的普遍性。salas等 (20o1)报
告1例强监案的头发．在同一根被害人头发的2个不
同部位取材．竟然发现序列有差异．一个结果是16 093
t．16 189t：另一个结果是16093c／t．16 189c／t 由于
序列测定检测mtdna异质性灵敏度较低． 因而
mtdna异质性的出现对测序这种在法医学实践中应
用最广泛的mtdna鉴定手段是一种挑战
当比对两份mtdna的序列时．若dna序列相同
则表明这两份检材有可能来自同一个人或同一个母
系亲属，尤其是它们之间还具有相同的异质性时．这
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